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PCR酶选择指南

691 人阅读发布时间:2023-09-01 17:12

PCR是分子生物学技术的基础,具有操作简便、快捷、灵敏度高等特点,是研究基因组学或后基因组学必备工具,因此在生物科学研究领域具有应用的广泛。从基因克隆、QTL基因定位、菌落分析、基因分型、下一代测序(NGS)到IVD诊断中的肿瘤筛查、癌症用药靶点筛查、病原体检测、液体活检、优生优育等,以及海关检验、法医侦查等,都离不开PCR技术的助力分析。那么,面对种类繁多的PCR酶,我们要如何选择,才能获得令人满意的PCR实验结果?在这里,选择一款合适的变得尤为重要。

PCR的概念及原理
PCR,即聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),是指将一段目的基因序列经过n轮的扩增,放大2n-1倍。其原理如下图:

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PCR酶的分类及选择
由于华美PCR酶种类繁多,为了便于大家更直观的了解本公司的产品,小编以思维导图的形式给大家呈现。

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第一类:常规PCR扩增 
常规PCR扩增,主要以基因分型、钓取目的基因或者基因定位,可以选择华美的普通Taq酶或者直扩Taq酶。另外,模板是RNA片段的,则第一步需要选择逆转录酶得到第一链cDNA,再选择合适的Taq酶进行下一步扩增。
常规普通PCR扩增 

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血液直扩 

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植物直扩(即将推出) 

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水稻叶片直扩基因分型

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第二类:高保真PCR扩增 
如果扩增的目的基因,需要保证序列的保真度,将序列进行亚克隆进行后续的基因表达、功能验证等工作,则需要选择高保真酶。

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第三类:荧光定量PCR扩增
如果您想做染料法qPCR,可以选择华美专门优化的2×SYBR Green qPCR预混液(2×SYBR Green qPCR Mix)。

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如果您想得到更精确的定量结果,可以选择探针法qPCR的试剂盒。华美2×TaqMan多重实时荧光定量预混液(2×TaqMan Multiplex qPCR Master Mix),组分经过优化,能⽤于多种qPCR环境,进行多重PCR扩增。

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另外,如果模板是RNA,华美也推出了一步法RT-qPCR试剂盒。一步法RT-qPCR试剂盒(One Step RT-qPCR Kit ),采用了华美新一代的MMLV酶+高性能Taq酶的组合,能够为您呈现更优美的扩增曲线和更高的灵敏度。

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这个大类里面要特别强调一个比较特殊的酶,即ARMS Taq酶,即扩增阻滞突变DNA 聚合酶(ARMS Taq DNA Polymerase)。

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ARMS Taq DNA Polymerase是新一代抗体法热启动Taq酶,经基因工程改造而成,可以准确识别引物3’端单碱基错配,只需要在引物3’端设计一个识别碱基,即可以实现高度特异性的ARMS检测。该酶既适用于荧光PCR平台,又适用于数字PCR平台。在该酶的基础上开发了2×Multiplex ARMS qPCR Mix具有很强的阻滞能力,能够有效进行ARMS-PCR介导的基因分型。其中缓冲液和Taq酶进行专门优化,含有扩增所需的离子及dNTPs等,无需额外添加。

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第四类:数字PCR扩增
什么是数字PCR?数字PCR(Digital PCR,dPCR),通过将待测样本进行极限稀释,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行PCR扩增,可以检测到低至一个拷贝的突变。

数字PCR是一种绝对定量的核酸检测方法。其和传统的qPCR具有相同之处,都需要模板、引物、探针、酶以及适合的扩增buffer体系等,都需要经过PCR扩增,使荧光信号富集;但是dPCR又和qPCR具有不同之处,qPCR的荧光信号是实时采集的,而dPCR信号是终点采集的,因此dPCR在PCR扩增阶段就是一个普通的PCR过程。由于dPCR的信号是终点采集,因此扩增完成后,可以根据需要在一定时间内进行信号采集,同时可以把多个批次的数据同步采集进行分析。


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华美生物,与国内头部的数字PCR公司深度合作,即将推出多款数字PCR产品。

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华美生物不仅可以为客户提供相关分子生物学产品,并且能够根据客户需求依托公司深厚的技术积累和研发创新实力,为客户提供个性化定制开发和针对性的系统解决方案,以客户为中心,全力满足客户需求。



武汉华美生物工业原料事业部提供优质的单克隆抗体、多克隆抗体、诊断蛋白、生化酶、分子生物学产品以及通用原料,同时可以为客户提供oem试剂及专业的定制化服务。产品全面覆盖炎症标志物、心肌标志物、肿瘤标志物、肝功肾功、甲功激素、自身免疫疾病、呼吸道病原体、动物传染病等领域;广泛应用于免疫比浊、免疫层析、酶联免疫、化学发光、临床生化和分子诊断等平台。可为广大体外诊断试剂厂商提供一定量的免费试用装,赶紧联系我们哦!

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