您买的蛋白是您要的蛋白么？CUSABIO六大质控标准，100%捍卫蛋白品质

酵母、大肠杆菌、昆虫杆状病毒、哺乳动物细胞表达系统在表达重组蛋白方面各有其优缺点。一个给定的表达系统能否高水平表达蛋白质并获得高质量的产品，这在很大程度上取决于该蛋白质。在选择表达方法时，必须认真地评估重组蛋白的特性及下游的应用。例如用于结构研究时，重组蛋白的表达要求正确的蛋白质折叠、形成正确的二硫键、均一的重组产物。
 

蛋白的物理稳定性变化主要是高级空间结构的改变，或者分子之间共价键的作用影响，导致蛋白质出现凝聚或沉淀，从而改变其性状。化学稳定性可能来源于多种因素的影响，出现蛋白质分子的变化，如化学键的断裂、新共价键形成等，生成蛋白质分子结构变异体，甚至是新的化学实体，从而丧失生物学活性，产生严重的毒副作用。

尽管蛋白质生物制品总体来说是相对稳定的分子，但是在生产、制剂和储存过程中，还是会发生一些化学修饰和降解反应。许多蛋白质在纯化过程中可能发生水解断裂，而断裂形成的片段污染物可能会导致患者免疫反应的不良后果。

由于存在化学修饰和降解反应，因此需要可靠而且灵敏的方法来评价研发和生产过程中蛋白质的纯度和结构完整性。 完整蛋白质、完整亚基或结构域的精确质量测定对于蛋白质序列组成的快速确认和翻译后修饰、降解和样品处理引起的分子变异的鉴定非常有帮助。

同时华美生物所有蛋白产品都会经过严格的质量控制，包括蛋白质的浓度测定、纯度测定、分子量检测、内毒素检测、活性检测及蛋白测序等。

★蛋白质质量控制的流程图如下：

1. 蛋白浓度测定

蛋白质浓度检测的方法有bradford法、BCA法、A280法，根据缓冲成本选择合的检测方法，其中最常用的为bradford法，浓度检测的范围为1-5 mg/ mL。Bradford法标准曲线如下图所示：

2. 蛋白分子量检测

蛋白质分子量检测采用考马斯亮蓝显色结合SDS-PAGE检测，分子质量跟氨基酸序列推测的理论分子质量一致。重组小鼠 Calreticulin(Calr)蛋白理论分子质量为73.3kDa，其检测结果如下：

3. 蛋白质纯度检测

蛋白质纯度检测采用考马斯亮蓝显色SDS-PAGE分离蛋白，通过bandscan软件分析蛋白质的纯度，蛋白质的纯度需达到90%。

4. 蛋白内毒素检测

内毒素检测采用 LAL方法，内毒素含量低于1 EU/ μg。

5. 蛋白质活性检测

蛋白质活性检测有ELISA方法，细胞活性检测，酶活性检测方法三种方法，其中受体蛋白主要采用ELISA方法，细胞因子类蛋白采用细胞活性检测法，酶类采用活性检测方法。

Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized ACKR1 at 1 μg/ mL can bind human CCL2, the EC50 of human CCL2 protein is 48.64-60.24 μg/ mL.

Measured in a cytotoxicity assay using L‑929 mousefibroblast cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The ED50 forthis effect is 33.32-47.38 pg/ mL

6. 蛋白测序

蛋白质质谱鉴定是蛋白质组学研究的核心技术之一，是鉴定蛋白质的主要方法。质谱分析可分为两类：MALDI-TOF和LC-MS / MS，其中，LC-MS / MS具有更高的灵敏度和几乎100％的可靠性，这是文献中最常用的方法。目前，从蛋白质样品混合物中鉴定单一蛋白是蛋白质研究中的一个核心问题。分离蛋白质混合物有两种常用方法：二维凝胶电泳（2-DE）和聚 丙xi.酰.胺凝胶电泳（SDS-PAGE，十二烷基硫酸钠聚丙.烯酰胺凝胶电泳）。

现今，华美生物的蛋白质凝胶条和凝胶点鉴定已经形成了一套成熟的流程，主要包括通过一维或二维电泳获得目标蛋白条带和斑点，并连续优化凝胶内酶解方法，然后通过LC-MS / MS分析获得蛋白质碎裂芯片电荷，峰图和其他相关信息。该方法可以显着提高质谱鉴定的成功率和蛋白质凝胶消化中肽的覆盖率。

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