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374 人阅读发布时间:2024-09-09 11:26
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单B细胞抗体发现通常是高通量的,不仅能够高效地筛选出特定抗体的B细胞,还能借助RT-PCR和测序快速获得抗体基因序列,有助于快速获得重组抗体。并且能够直接从免疫个体中获取单个B细胞,更好地反映自然免疫应答中产生的抗体,确保了抗体的多样性。总结来说,就是在保持高特异性和亲和力的同时,能够提供更快的抗体发现过程,并减少免疫原性问题。
特定抗体基因的重链和轻链会分别从单个 B 细胞中扩增出来,在转染细胞中共同表达重链和轻链。相比于质粒构建再转染,华美生物引入线性载体构建直接转染,节约质粒构建时间,加快抗体发现速度。
在微流控技术中,可以将单个B细胞与抗原或者其他标记物混合,实现抗体筛选。在荧光激活细胞分选(FACS)等技术中,可首先根据细胞大小和颗粒度等物理特性筛选,再根据细胞表面的标志物进行筛选,并且可以筛选出特定的B细胞亚群,如小鼠B细胞可使用 CD19 作为表面标记物进行分选,然后使用IgG 阳性和IgM 阴性标记物进行进一步筛选。
记忆B细胞是在初次免疫应答之后形成的,携带的抗体通常具有高度特异性。浆细胞则是B细胞分化的一种终末分化细胞,它们的主要功能是大量产生和分泌抗体。记忆B细胞在受到抗原刺激后,经过一系列的信号传导和分子事件,最终会分化为浆细胞。整个分化过程中,还存在一个中间阶段细胞,成为过渡浆细胞,过渡浆细胞通常保留一些记忆B细胞的表面标志物,如CD19、CD27等,但也会开始表达浆细胞的标志物,如CD138。
单B细胞技术在兔子和羊驼中的应用都涉及到从免疫动物中分离B细胞,通过微流控技术或流式细胞术等方法筛选出产生特异性抗体的单个B细胞,并从中克隆和表达抗体。兔子和羊驼各自具有独特的免疫系统特点,比如兔子中可以获得更高亲和力的抗体,羊驼中可以获得独特的纳米抗体。
但是专门针对此类动物的B细胞表面标志物的抗体较少,且需要调整现有的单B平台去适应,尽管可用的工具和资源相对较少,但是仍然具有相当大的潜力。华美生物也正在开发此类平台。
