蛋白酶K(Proteinase K)，来源于林伯氏白色念球菌，属于丝氨酸蛋白酶类。蛋白酶K具有极高的酶活性和广泛的底物特异性，能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端邻接的酯键和肽键。在pH4.0到pH12.0均有活性，最适pH在7.5-8.0之间，最适温度在50-55℃之间。在0.2-1%SDS或者10mM尿素存在下，蛋白酶K显示出更高的活力，而在常用浓度的EDTA，Triton X-100，盐酸胍存在下均对蛋白酶K活力影响不大。

 

蛋白酶K的应用

 

在新冠等生物检测中的应用

对于新冠病毒，核酸扩增试验时的处理、抽提、扩增为高风险，因此扩增前需要对标本先行灭活病毒，蛋白酶K(Proteinase K)是病毒采样液的重要组分，可裂解病毒释放核酸，消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。并且可以灭活病毒，让病毒的蛋白变性，失去活性而“死掉”，不再有传染性，提高运输和检测阶段的安全性。

 

在DNA、RNA提取过程中的应用

蛋白酶K能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离，在提取高分子量核酸时有很大的优势。蛋白酶K还常被用于RNA提取过程中RNase的抑制和降解。RNA的质量对于Northem印迹及杂交分析、cDNA合成及体外翻译等实验的成败至关重要。而RNA极不稳定、易于被广泛存在的RNase降解，因此利用蛋白酶创造一个无RNase的环境、严格防止RNase污染是成功提取RNA的关键。

 

在原位杂交中的应用

蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前标本的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以利于检测探针的穿透，提高检测的敏感性。

 

在灭活生活和工业用水中细菌的应用

病毒外层结构一般以衣壳蛋白为主，蛋白酶K可以对病毒衣壳蛋白进行破坏，从而干扰病毒与宿主细胞的结合。在一定条件下，67.51ug/mL浓度的蛋白酶K处理lh对纯水和生活污水中病毒灭活率分别达到了99.4％和49.4％，处理3h的灭活率分别是>99.9％和81.8％，灭活病毒的效果明显。用蛋白酶K进行病毒灭活的优点是消毒剂本身无害，而且不产生有害消毒产物，所以这是一种高效环保的方法。

 

在肉类嫩化中的应用

蛋白酶K能分解肉的肌纤维，结缔组织的蛋白质，甚至包括弹性蛋白及胶原蛋白，使蛋白质的各级空间结构发生变化，部分肽键断裂，肉料吸水膨胀，质地变嫩，满足消费者对肉类品质的要求。

 

华美·科赛格蛋白酶K

 

华美·科赛格推出一批高质量的蛋白酶K(Proteinase K)，利用本公司生化检测平台对自产蛋白酶K进行表征，显示其纯度高，比酶活高。该产品应用于新冠核酸提取试剂盒 ，能完全消化各种核酸酶和其他蛋白质，防止病毒核酸降解，优化提取效率 ，液体/冻干粉均可提供，可满足新冠/HCV/HBV等检测需求。

 

校准曲线

配制不同浓度的L-酪氨酸标准溶液，直接用紫外分光光度计于275nm测定其吸光度（A），以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标，绘制校准曲线。根据校准曲线，计算出比酶活≥30 U/mg。

 

图1.以L-酪氨酸为标准品测定校准曲线

 

纯度

通过SDS-PAGE电泳来检测蛋白浓度，本公司自产的蛋白酶K的纯度在95%以上，大小在28.9kDa。

图2.蛋白酶K的SDS-PAGE电泳图

 

稳定性

将蛋白酶K置于4℃存储一年，每隔1个月测酶活性，结果如下图，表明蛋白酶K稳定性好，酶活维持在95%以上。

 

图3.蛋白酶K在4℃下的稳定性检测

 

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