新产品推介—嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）

嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase，PNP或PNPase，EC2.4.2.1）或Inosine-Guanosine Phosphorylase 或Inosine Phosphorylas，是嘌呤补救合成途径的关键酶之一，广泛存在于原核和真核生物中。该酶可逆地催化嘌呤核苷磷酸解反应，将底物嘌呤核苷分解成对应的碱基及核糖-1-磷酸。

在体外反应时，若加入另外一种嘌呤碱基或其类似物，可以合成新的嘌呤核苷或类似物，现已广泛用于微生物酶法生产核苷类抗病毒药物，如阿糖腺苷、利巴韦林等。

嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）

科赛格最新研发的嘌呤核苷磷酸化酶（PNP），通过生化平台对其进行酶学性质、固体稳定性、临床等性能方面进行反复验证，以一家高质量的试剂盒作为比对试剂，在同样的条件下对多个临床血清测值，发现两者之间有很好的临床相关性，可以用于体外诊断。

稳定性

PNP冻干粉稳定性：

分别制备PNP冻干粉，将其放置 37℃热破7天、14天后，分别与放置在-20℃的PNP冻干粉比较，检测其酶活。如图1显示，二者比活相对偏差在10%以内，说明PNP冻干粉稳定性良好。

图1 PNP冻干粉稳定性

临床比对

利用科赛格自产腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂与一家高质量腺苷脱氨酶（ADA）诊断试剂（腺苷脱氨酶正常范围为4-22 U/L）同时测82例临床样本（如图2），结果显示两组试剂临床相关性高达0.99，说明科赛格生产的腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂可以应用于临床检测。

图2 临床比对

准确度

利用科赛格自制腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂检测相关质控品，用同两个批次的试剂检测同一个水平的第三方质控品，如表1所示，实际检测平均值与目标靶值相对偏倚＜2%，证明准确度高。

表1 腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂准确度

精密度 

自制腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂对2份定值血清重复测试10次，计算出批内变异系数。如表2显示，变异系数CV<6%，证明腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂精密度高。

表2 腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂精密度

酶学性质 

最适反应pH：

制备不同的缓冲液（50 mM：pH 4.0-5.0 Na-phosphate-citrate；pH 5.5-7.5 K-phosphate；pH 8.0-9.0 Tris-HCl；pH 9.5-11.0 CAPS-NaOH）在37℃条件下，检测其酶活。如图3所示，PNP的最适反应pH在8.0-8.5之间。

图3 最适反应pH

（37℃，50 mM缓冲液：pH 4.0-5.0 Na-phosphate-citrate；pH 5.5-7.5 K-phosphate；pH 8.0-9.0 Tris-HCl；pH 9.5-11.0 CAPS-NaOH）

最适反应温度

制备50 mM K-phosphate pH 7.7的缓冲液，在不同温度下检测其酶活。如图4所示，PNP的最适反应温度为55℃。

图4 最适反应温度

（50 mM K-phosphate，pH 7.7）

pH稳定性

制备不同的缓冲液（50 mM缓冲液：pH 4.0-5.5 Na-phosphate-citrate；pH 6.5-7.5 K-phosphate；pH 8.0-9.0 Tris-HCl；pH 9.5-10.0 CAPS-NaOH；pH 10.5-11.5 Na-phosphate-NaOH），PNP液体酶加入溶液中使最终浓度为0.7 U/mL，30℃处理16 h之后，37℃检测其酶活。如图5所示，PNP在pH 9.5-10.0最稳定。

图5 pH稳定性

（30℃，处理16 h，50 mM缓冲液：pH 4.0-5.5 Na-phosphate-citrate；pH 6.5-7.5 K-phosphate；pH 8.0-9.0 Tris-HCl；pH9.5-10.0 CAPS-NaOH；pH 10.5-11.5 Na-phosphate-NaOH；酶浓度：0.7 U/mL）

温度稳定性

制备50 mM K-phosphate pH 7.5的缓冲液，PNP液体酶加入溶液中使最终浓度为0.7 U/mL，在不同温度下处理15 min后，检测其酶活。如图6所示，温度在30-65℃时PNP比较稳定。

图6 温度稳定性

（处理15 min，50 mM K-phosphate pH 7.5，酶浓度：0.7 U/mL）

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抑制剂因素

制备50 mM Tris-HCl pH 8.0的缓冲液，溶解PNP冻干粉，使最终浓度为1.35 U/mL，在37℃下处理20 min后，检测其酶活。如表3所示，Na+等对其有激活作用。

表3 抑制剂影响因素